生物化学实验是几代教师不断探索而搭建的集技能训练、创新能力、科研思维训练培养于一体的综合型实验课程。课程以问题为导向,围绕E.coli的碱性磷酸酶的纯化、活性分析、特性分析和免疫检测设计课程体系。实验项目包括教师讲解、实验操作、虚拟仿真三部分。讲解部分着重从实验设计和技术应用层面介绍实验背景,以及如何基于研究问题和研究目标设计实验,有助于学生理解实验内容,培养学生的科研思维能力;实验操作部分以微距近景的方式呈现完整的实验流程,使学生进一步理解实验设计,掌握操作细节;虚拟仿真项目让学生通过操作模拟的方式完成实验过程,掌握实验技术与方法,弥补实验类慕课无法让学生自主进行实验操作所导致的不足,辅助提升教学效果。
1 实验总论及主要生物化学仪器的使用
1.1 绪论(实验理论)
1.2 缓冲液的配置(实验操作)
1.3 常用仪器的操作(实验操作)
无菌操作及主要仪器设备的使用单元测验
2 蛋白浓度及酶活性的测定
2.1 利用G250测定蛋白质浓度(实验操作)
2.2 利用连续法测定酶的活性(实验操作)
2.3 蛋白质含量的测定(实验理论)
2.4酶活性的测定(实验理论)
2.5 利用终止法测定酶的活性(实验操作)
酶活性的测定单元测验
3 凝胶过滤层析分离标准蛋白
3.1 凝胶过滤层析分离标准蛋白(实验理论)
3.2 凝胶过滤层析分离标准蛋白(实验操作)
凝胶过滤层析分离标准蛋白单元测验
4.碱性磷酸酶AKP的原核表达
4.1 外源基因的诱导表达(实验理论)
4.2 AKP的原核表达(实验操作)
基因表达测验
5. AKP的分离纯化
5.1 AKP的分离纯化(实验理论)
5.2 细胞破碎(实验操作)
5.3 离子交换层析(实验操作)
5.4盐析(实验操作)
5.5 分子筛层析分离AKP(实验操作)
5.6AKP的浓缩(实验操作)
AKP纯化测验
6. AKP蛋白纯化方案的评估
6.1 蛋白纯化方案的评估(实验理论)
6.2 AKP分离纯化参数的测定(实验操作)
蛋白纯化方案分析测验
7. SDS-PAGE法分析AKP的纯化效果
7.1 SDS-PAGE原理(实验理论)
7.2SDS-PAGE电泳(实验操作)
SDS-PAGE 测验
8. AKP的动力学性质分析
8.1AKP的动力学分析(实验理论)
8.1 AKP的动力学分析(实验操作)
酶促反应动力学测验
9. AKP的特性分析
9.1 抑制剂对酶促反应的作用(实验理论)
9.2抑制剂对酶促反应的作用(实验操作)
9.3激活剂,温度,pH对酶促反应的作用(实验理论)
AKP活性影响因素测验
10. 快速液相色谱分离纯化AKP
10.1快速蛋白液相层析简介(实验原理)
10.2应用快速蛋白液相层析纯化AKP(实验原理)
10.3 应用快速蛋白液相层析纯化AKP(实验操作)
FPLC测验
11. AKP多克隆抗体的制备
11.1多克隆抗体制备原理(实验理论)
11.2腹水法多克隆抗体制备(实验操作)
多克隆抗体制备测验
12. ELISA和Western Blot分析制备的AKP多克隆抗体
12.1 ELISA和Western Blot的原理(实验理论)
12.2 ELISA技术-包被和封闭 (实验操作)
12.3ELISA技术-显色检测(实验操作)
12.4Western Blot技术: 转膜,杂交及显色检测 (实验操作)
Western blot 和ELISA技术测试
13. GST-Pulldown 技术分析蛋白质相互作用
13.1蛋白质相互作用原理(实验理论)
12.2 GST-Pulldown操作(实验操作)